关于微生物菌种的培养储藏，微生物菌种每年都要复活的话，那二代三代菌种如何维持？

初代菌种复苏的话，那明年是按照初代复苏的，还是按照二代复苏？

二代三代全部制备为甘油菌种进行冻存，一般可以冻存2-3年，可以每年取出进行复苏检查活性，如活性无减弱可以继续冻存，如活性明显减弱，需要保存二代菌种的，将初代菌种复苏进行增菌培养获得二代菌种，然后将二代菌种甘油冻存。

初代菌种，明年复苏时，应该仍然使用原始保存的「初代菌种」进行复苏。

工作菌株的传代次数应严格控制，不得超过5代（从菌种保藏机构获得的标准菌株为第0代），以防止过度的传代增加菌种变异的风险。1代是指将活的培养物接种到微生物生长的新鲜培养基中培养，任何形式的转种均被认为是传代1次。必要时，实验室应对工作菌株的特性和纯度进行确认。

微生物菌种培养，每批次样品保存周期，以及实验室操作方式是怎样的？

-80℃冰箱或-196℃液氮甘油冻存菌种2-3年，2-8℃保存斜面培养基菌种1-3个月（具体时间需要验证），增菌后的TSB菌液放置在2-8℃24h内使用完毕。

对于大分子的基因毒性杂质的研究，是否和小分子一致，有没有具体的要求？

对于大分子的基因毒性杂质研究，和小分子的研究是类似的。现在还没有具体的指南要求。可以根据大分子的生产工艺和其中所涉及的物料，试剂，溶剂，中间体等进行综合判断来研究。

基因毒性杂质预测软件VEGA预测致突变性，有时候为预测结果是阳性，有时候为实验数据显示为阳性，这里的实验结果和ICH M7里面的实验结果阳性是一致的吗？

实验结果显示阳性，则证明一定是阳性。这个也可以通过一些网站和文献数据检索到。预测结果为阳性的，再结合统计学规则的预测软件来判断，如果两个软件预测结果均为阳性，则归为第二类杂质。如果结果不一致，需要使用专家知识来综合判断，或进行Ames试验来得出结论。